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关于用元明粉沉淀蛋白质

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关于用元明粉沉淀蛋白质

发布日期:2023-04-05 作者:网络 点击:

水合形式的钠硫酸盐 Na2SO4 +10 H20,具有以非常敷衍的方式用于蛋白质的沉淀;

对于血清白蛋白的沉淀,在球蛋白被用硫酸镁、乳清蛋白和一些植物白蛋白(蓖麻毒蛋白,相思豆,知更鸟)2。 Pavy 建议使用热估计前用于凝固蛋白质的元明粉溶液。

元明粉


尽管具有许多有价值的特性,但使用这种盐在生理化学上从来就不是很一般,主要在于它在常温下在水中的溶解度不足,因此沉淀能力不足,以及它以令人不满意的方式聚集在一起成为大块很快被沉淀的蛋白质包被,然后溶解极其困难。可以消除这些不便,并如果适当使用某些盐在其物理行为方面的特性。溶解度元明粉的浓度从 0C 开始增加。到大约 150 非常缓慢,并且然后迅速上升并在 340 C 时达到最大值。水合盐 Na2SO+10 H2O 仅以溶液形式存在高达 340 摄氏度,然后开始解离,进入无水状况;因为它的溶解度比前者小,超过 340 时,浓溶液开始分离无水盐,当溶液分离时,分离继续增加到 1030开始沸腾。

初步实验表明,在完全饱和的情况下,NaSO4 34°C下所有蛋白沉淀,下一步明显是放弃使用水合盐,因为它含有 550/0 的水,使用起来肯定太麻烦了。这无水盐没有前者的缺点。

它以细颗粒粉末的形式获得,它不会不容易从空气中吸收水分,当带入时与足量的水接触,尤其是在一定温度下不远低于30°,大约2-3分钟就变成水合盐小时。它很容易通过在铁中加热水合盐来制备坩埚,不应太深,放在相当大的火焰上弗莱彻燃烧器。在物质被液化后,Na2SO4 开始分开,建议将沸腾的液体搅拌至转化成一团像湿沙子,然后盖住坩埚,加热全火5-10分钟。分离的盐沸腾时从坩埚中取出,多孔,很容易地面。

由于无水盐本身用于某些行业,因此很容易以低价获得足够纯净的状态,这是唯一的预防措施正在-测试它的氯化钠并在使用前加热它短时间,以确保其无水。对于沉淀,最好先将蛋白质溶液加热至大约 30' C.,然后加入不要太多的无水盐一次连续摇晃或搅拌。将混合物静置,优选在约 400 度下放置 12 小时,然后过滤通过热水漏斗,或者更好,同时在培养箱中温度。应特别注意防止盐分在过滤器上结晶,然后蛋白质将开始溶解并进入滤液。过滤后,-和这个,如果所有的预防措施已经观察到,很容易和完全,-沉淀物是用冷水溶解在过滤器上,其温度将定义溶解的元明粉量;后者可以是从表 I 估计。无论何时可能需要保留

在溶液中尽可能少盐,应使用冰水。

这样得到的溶液可以再沉淀;然而,似乎最好,尤其是在有糖的情况下,通过骆驼毛刷将原始沉淀物从过滤器中带到宽阔的烧杯,装有所需强度的元明粉溶液,和在 400 下进一步静置 12 小时后过滤。漏斗和烧杯应该先加热。

滤液有两种处理方式;如果单纯的定性检查时,最好让它慢慢冷却。

然后盐结晶成大晶体,剩下的液体可以倒掉。

出于定量目的,应稀释滤液——如有必要如果可能,在冰上快速冷却,分离开始于用玻璃棒摩擦容器壁。元明粉然后分离成细小的晶体,在泵上过滤并洗涤用冷水。无论哪种情况,都应该记住 9 个部分

元明粉吸收 11 份水。

实验进行了:蛋清、结晶蛋清蛋白、来自哭泣的残留物前者的停滞,湖水(ox)、血清(羊血清、牛血清和马血清)、纤维蛋白原、血清球蛋白、血清白蛋白、牛奶、酪蛋白溶液、乳清蛋白和四种组分

采用 Pick' 方法后的 Witte 蛋白胨。实验2

结果如下:

从上面可以明显看出,典型的蛋白质可能是用元明粉从它们的溶液中沉淀出来

30 40°,也可能是 Witte 蛋白胨的这些部分用硫酸铵沉淀。实验证据表明

此外,这种方法可以很好地将球蛋白从白蛋白,以及相当深远的分馏,就例如纤维蛋白原和酪蛋白原有关。这同样适用于专辑维特蛋白胨。

此外,元明粉的使用可以扩展到球蛋白半饱和沉淀的情况

对于硫酸铵,15 0/0 的前一种盐就足够了

此实例沉淀剩余的白蛋白。



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